Новости АССОЦИАЦИЯ Мероприятия Статьи Литература Атрибутика ГистоКлаб

Новости

АССОЦИАЦИЯ

Мероприятия

Статьи

Литература

Атрибутика

ГистоКлаб



8 800 700 92 46
info@histoclub.ru

^ Наверх

Метод для единовременного окрашивания меланина и колагеновых волокон.
(назад к оглавлению статей)

Реферат статьи VS Carriel, J Aneiros-Fernandez, S Arias-Santiago et al. A Novel Histochemical Method for a Simultaneous Staining of Melanin and Collagen Fibers. Histochem Cytochem. 2011 Mar; 59(3): 270–277.

С пролиферацией меланоцитов связаны многие заболевания, в том числе и такая тяжело поддающаяся лечению форма рака, как меланома. Для диагностики подобных заболеваний присутствие меланина должно быть установлено в препарате гистохимическими методами, поскольку с помощью обычной обзорной окраски гематоксилином и эозином его не идентифицировать. Одним из распространённых способов выявления меланина является окраска по Фонтана-Массону, основанная на восстановлении аммиачного серебра с участием анионных компонентов меланина, в результате чего образуется тёмный осадок серебра. Однако при такой окраске не видны морфологические особенности ткани. Также для диагностики может потребоваться оценка содержания в ткани коллагена, которую тоже не провести с помощью метода Фонтана-Массона.

Исправить положение решили специалисты из Испании, и их опыт оказался успешным. Они модифицировали протокол – добавили к методу Фонтана-Массона окраску пикросириусом и опробовали его на материале 52 различных новообразований кожи, в том числе пяти меланом. Материал фиксировался в формалине, как и все остальные образцы, поступавшие в лабораторию, и далее обрабатывался стандартно.

Краситель по Фонтана-Массону готовили по следующей прописи: к 95 мл 10%-ого нитрата серебра добавляли по капле гидроксид аммония, пока не появлялся осадок, затем доливали ещё 1 мл 10% нитрата серебра; через 4-24 часа такой раствор разводили, добавляя 2,5 мл раствора в 47,5 мл дистиллированной воды. Стёкла помещали в растворы и окрашивали в течение трёх циклов в микроволновой печи при максимальной мощности, по 50 секунд каждый. Между циклами стёкла промывали дистиллированной водой. Дифференцировка проводилась хлоридом золота в течение 5 минут, закрепление осадка серебра осуществлялось 2% тиосульфатом натрия. После этого проводили окрашивание красным сириусом F3B, который предварительно разводили в 100 мл насыщенного раствора пикриновой кислоты в количестве 0,2 г. Срезы окрашивали полчаса при комнатной температуре, и, после контрастирования гематоксилином Гарриса, обезвоживали, промывали в ксилоле и заключали под покровное стекло. Окрашивание сириусом красным позволяло выявить в материале коллаген.

С помощью предложенной комбинированной окраски можно оценить накопление меланина, увидеть происходящие перестройки морфологической структуры, и, в частности, цитоскелета, затрагивающие как собственно изменённую ткань, так и ткань, окружающую новообразование. Метод позволял провести более комплексное исследование препарата, чем существующие общепринятые технологии. Результаты нового протоколы окрашивания можно оценить на фотографии.


Назад к оглавлению статей
Назад

Яндекс.Метрика