Новости АССОЦИАЦИЯ Мероприятия Статьи Литература Атрибутика ГистоКлаб

Новости

АССОЦИАЦИЯ

Мероприятия

Статьи

Литература

Атрибутика

ГистоКлаб



8 800 700 92 46
info@histoclub.ru

^ Наверх

Новый протокол: Диагностика микозов с помощью двойного окрашивания
(назад к оглавлению статей)

Существует много способов выявить грибы в гистологическом материале. Наиболее часто используются ШИК-реакция или окраска по Грокотту. Однако если нужно точно оценить, как именно располагаются клетки патогена в тканях, возможности этих окрасок ограничены. Чтобы решить эту проблему, специалисты нескольких медицинских центров в США решили адаптировать комбинированную окраску гематоксилином-эозином и метенамином серебра для того, чтобы одновременно увидеть на стекле и грибы, и ткань.
Чтобы проверить применимость данного метода, в их распоряжении был материал от 12 больных с различными микозами: гистоплазмозом, бластококкозом, криптококкозом, аспергиллёзом, кандидозом и отрубевидным лишаем. При этом доступны для исследования были различные ткани, в том числе лёгкие, печень, кишечник, кожа, пищевод, костная ткань и образцы мягких тканей. Весь материал фиксировался в 10% формалине, проводился и заливался в парафин по стандартным протоколам, принятым в лабораториях. Для работы использовались срезы, толщиной 3-4 мкм.
Как обычно, процедура окрашивания начиналась с депарафинизации, после которой следовала обработка 10% хромовой кислотой. Стёкла, промытые после этого 3-4 раза дистиллированной водой, помещались на одну минуту в раствор бисульфита натрия для устранения остатков хромовой кислоты, с последующей промывкой в проточной воде 5-10 минут и в дистиллированной воде 3-4 раза. На следующем этапе срезы погружались в метенамин серебра при 58-60 °C до тех пор, пока ткань не приобретёт жёлто-коричневый цвет. После этого стёкла промывались в воде 6 раз и помещались в раствор хлорида золота (0.2%) на 2-5 минут, и снова промывались 3-4 раза. Остатки серебра устранялись тиосульфатом натрия в течение 2-5 минут. После промывки 10 минут в проточной воде приступали к окраске гематокслином Гарриса. Стёкла погружались в гематокслин на 10 минут, 3-4 раза промывались водой, просветлялись и снова промывались водой 3-4 раза. После 10 минут в подсинивающем растворе стёкла дважды промывались в водопроводной воде, помещались на одну минуту в этанол (95%) и, затем, в эозин на 5 минут. После обезвоживания спиртом и ксилолом препараты готовы к заключению.
Здесь есть два принципиальных момента. Во-первых, крайне важно как следует отмыть стёкла перед началом окрашивания гематоксилином, поскольку остатки серебра могут привести к образованию серого фонового окрашивания. Также обращает на себя внимание длительное окрашивание гематоксилином и эозином. Это также связано с необходимостью исключить сероватый фон от серебра.
С помощью такой окраски все типы грибов выявлялись также успешно, как при окрашивании препарата по Грокотту, с другой стороны, окружающие ткани можно было исследовать также, как ткани, окрашенные по стандартному протоколу гематоксилином-эозином. Это позволяет оценить локализацию грибов относительно клеток, что может быть важно для назначения лечения или уточнения систематической принадлежности возбудителя. К тому же, в тех случаях, когда количество материала ограничено, такая комбинированная окраска позволяет использовать для стандартного гистологического исследования и для выявления патогена одно стекло. Если сравнить два препарата, то, действительно, можно сказать, что на первом, окрашенном согласно предложенной методике, расположение гриба в тканях более понятно, чем на втором (окраска по Грокотту).
По материалам Journal of Histotechnology, L.W. Lamps, L.R. Talley, C.T. Nolen et al. A Combined Hematoxylin and EosinIMethnamine Silver Stain for the Histological Diagnosis of Fungi in Tissue Sections / The Journal of Histotechnology - Vol. 23, No. 4. – P.341-5.


Назад к оглавлению статей
Назад

Яндекс.Метрика