Новости АССОЦИАЦИЯ Мероприятия Статьи Литература Атрибутика ГистоКлаб

Новости

АССОЦИАЦИЯ

Мероприятия

Статьи

Литература

Атрибутика

ГистоКлаб



8 800 700 92 46
info@histoclub.ru

^ Наверх

Микротомия: обзорная статья
(назад к оглавлению статей)

Получение среза с парафинового блока – самый ответственный этап изготовления гистологического препарата: именно по нему оценивается уровень мастерства лаборанта, при этом именно на нём проявляются дефекты, допущенные на этапах вырезки, фиксации, проводки, заливки и т.д.
Предметные стёкла, на которые впоследствии будут крепиться полученные срезы, выпускаются на различных этапах подготовки. Лучший и наиболее дорогостоящий вариант – заранее покрытые адгезионными средами. Такие стёкла не требуют никакой подготовки, кроме нанесения маркировки в соответствии с записью на парафиновом блоке. Следующий, наиболее распространённый, вариант стёкол – очищенные. Такие стёкла готовы к использованию без нанесения адгезивной среды при условии правильной техники подсушивания. Применяемой до сих пор адгезивной средой является смесь равных объёмов взбитого профильтрованного яичного белка и глицерина, наносимая на сухое предметное стекло по каплям с последующим растиранием по всей поверхности и подсушиванием, однако от использования этого этапа подготовки предметных стёкол можно отказаться. Наибольшие затруднения возникают при работе с дешёвыми стёклами, нуждающимися в обезжиривании, для которого используется смесь 96% этанола в равных объёмах с этиловым эфиром. Оценить качество такой обработки можно, поместив на поверхность высушенного стекла небольшое количество дистиллированной воды: в случае полноценного обезжиривания она будет свободно растекаться по предметному стеклу, а не собираться в капли.
Изготовление срезов осуществляется посредством микротомов, которые принципиально можно разделить на два вида: санные и ротационные. Последние являются более современными и обладают рядом преимуществ, благодаря которым процесс получения среза становится проще с технической точки зрения, а значит сокращается время обучения работе с ним, повышается качество срезов (которое в данном случае определяется регулярностью получения срезов конкретной необходимой толщины), увеличивается производительность.
Лезвия, используемые для изготовления срезов, могут быть как многоразовыми, так и одноразовыми, однако с учётом сложности правки и заточки многоразовых ножей (в прежние годы являвшейся целой отдельной отраслью гистологической техники), в последнее время предпочтение отдаётся одноразовым лезвиям, используемым уже практически повсеместно. Одним из преимуществ одноразовых лезвий является их разнообразие, зависящее от вида режущей кромки, позволяющее подобрать лезвие под конкретный материал (твёрдый, обычный, мягкий). Маркировка лезвий в зависимости от назначения у каждого производителя разная.
В общем и целом все нюансы процесса получения среза зависят от плотности фрагмента ткани, залитого в блок, и самого парафина. Плотность парафина зависит от его состава, качественного и количественного содержания присадок, условий хранения, равномерности и длительности охлажения на этапе заливки, температуры и влажности окружающей среды. Плотность залитого в блок материала зависит от типа ткани и правильности всех предыдущих этапов: декальцинации, фиксации, обезвоживания, пропитывания парафином и т.п.
Хотя теоретически современные микротомы позволяют получать срезы толщиной 1 мкм, среднюю толщину используемых в рутинной работе срезов справедливо обозначить в пределах от 3 мкм до 5 мкм. После настройки микротома, установки необходимого угла лезвия и удаления с блока поверхностного слоя парафина, получают срез, снимают его с лезвия при помощи препаровальных игл или кисточек и переносят на поверхность водяной бани для расправления. Температура водяной бани должна находиться в пределах 40-45оС - достаточно для того, чтобы парафин в срезе мобилизовался, распрямляя складки, получившиеся в ходе получения среза. Расправленные срезы переносят на подготовленные предметные стёкла, аккуратными вытесняющими движениями удаляя из под них воду при помощи фильтровальной бумаги. Для удаления остатков воды и окончательной фиксации срезов к предметному стеклу используется специальный столик, рекомендуемая температура которого должна находиться в пределах 37-42оС. Предметные стёкла помещаются на него вначале горизонтально на 15-20 секунд, благодаря чему парафиновые срезы, слегка подплавляясь, фиксируются на стекле без необходимости использования адгезивной среды, затем вертикально с помощью штатива – тем самым обеспечивается защита от избыточного нагревания, деформирующего парафиновые срезы, а излишки воды свободно стекают вниз. Длительность пребывания предметных стёкол на подогревающем столике сильно варьирует, но в среднем составляет 30 минут.


Назад к оглавлению статей
Назад

Яндекс.Метрика