Новости АССОЦИАЦИЯ Мероприятия Статьи Литература Атрибутика ГистоКлаб

Новости

АССОЦИАЦИЯ

Мероприятия

Статьи

Литература

Атрибутика

ГистоКлаб



8 800 700 92 46
info@histoclub.ru

^ Наверх

Проводка: обзорная статья
(назад к оглавлению статей)

Проводка – этап обработки гистологического материала, следующий после фиксации, он завершается пропитыванием материала парафином, после чего ткань может быть залита в блок. Дефекты, допущенные на этапе проводки, частично обратимы, тем не менее они могут привести к возникновению артефактов, затрудняющих диагностику, а их исправление связано с затратами реагентов и существенной потерей времени. Например, недостаточное обезвоживание материала затрудняет проникновение парафина в материал, что усложняет, либо делает невозможной резку парафиновых блоков, а так же негативно сказывается на восприимчивости ткани к окраске. Избыточное обезвоживание деформирует ткань, искажая истинный размер клеток, тканевых структур и их соотношение между собой вплоть до появления ложного атипизма, причины ошибочной диагностики злокачественного роста. Ошибки проводки, к счастью, как правило можно различить на этапе заливки и резки блока, предотвратив их последствия до поступления препарата врачу.
Как и в случае фиксации, на скорость и качество проводки влияет размер фрагментов материала, поэтому не стоит ожидать одинаково хорошей проводки всех образцов, если этот параметр значительно варьирует. Ещё одним моментом, от которого зависит полнота и скорость обезвоживания, является регулярная смена среды, в которой осуществляется проводка, поэтому важно своевременно заменять спирт, излишне загрязнённый удалённой из тканей жидкостью, жирами и другими компонентами ткани, заменяя его на новый. Также на результат может повлиять природа материала: особое внимание на этой стадии следует уделить фрагментам, содержащим жировую ткань, поскольку при работе с ними высок риск неполного обезвоживания, в таких случаях целесообразен пересмотр протокола проводки в пользу увеличения его продолжительности. Наиболее чувствительными к процессу обезвоживания являются биопсии и образцы, содержащие слизистые оболочки. При работе с ними нельзя допускать использования агрессивных сред и избыточной длительности пребывания в спиртах (как правило, достаточно 6-7 часов, либо 2-4 часов при использовании ускоренных протоколов).
Наиболее распространённым способом обезвоживания материала является проводка через этиловый или изопропиловый спирт. Для решения некоторых задач используют также метанол, бутанол и ацетон. При помещении ткани из формалина сразу в этанол высоких концентраций присутствует риск появления артефактов, поэтому, в случае проводки в этиловом спирте, материал последовательно помещают в ёмкости с этанолом возрастающей концентрации начиная с 50-60° и заканчивая 96° или абсолютным спиртом.
Изопропанол обладает лучшими обезвоживающими свойствами по сравнению с этанолом и при этом меньше подвергает ткани деформации, благодаря этим свойством всё большее количество лабораторий предпочитает использовать его для проводки. После фиксации ткань сразу помещают в изопропанол максимальной концентрации (порядка 95%, поскольку даже изопропанол быстро поглощает воду из воздуха). Материал последовательно перемещается из одной ёмкости в другую.
Как при проводке в этаноле, так и в изопропаноле используется как минимум 4-5 емкостей, и при ручной проводке, как правило, ограничиваются этим количеством. Если же используется автоматическая проводка, то количество емкостей может увеличивается до 10 и более.
Процесс проводки завершается помещением обезвоженного материала в промежуточную среду – вещество, способное смешиваться и с этанолом, и с парафином. Чаще всего используется ксилол, но также применяют хлороформ, бензол, толуол и другие реактивы. В случае использования изопропилового спирта необходимость в промежуточной среде отпадает благодаря его способности смешиваться с парафином. Для пропитывания следует использовать специально предназначенные для данного процесса сорта парафина, при этом строго следить за соответствием температуры в термостатах рекомендованной производителем температуре плавления. Полноценная инфильтрация парафином является заключительной стадией перед заливкой материала в парафиновые блоки.
Осуществление процедуры в ручном режиме может занимать до 24 часов. В автоматизированных системах используется ряд дополнительных воздействий на материал, которые позволяют сократить длительность данного этапа. Горизонтальное и вертикальное перемешивание реактивов, увеличение температуры до 35-40°С, проводка в условиях колебаний повышенного и пониженного давления и воздействие ультразвука сокращают продолжительность процедуры не влияя на конечный результат. Современные аппараты закрытого типа позволяют на любом этапе проводки использовать один или несколько ускоряющих факторов.


Назад к оглавлению статей
Назад

Яндекс.Метрика